مضان المجهر: مبادئ طريقة

الاستيعاب وإعادة انبعاث المزيد من السوائل العضوية وغير العضوية الخفيفة هو نتيجة تفسفر أو مضان. الفرق بين الظواهر هي مدة الفترة الفاصلة بين الامتصاص والانبعاث من تدفق ضوء. عندما مضان من هذه العمليات تحدث في وقت واحد تقريبا، في حين تفسفر - مع بعض التأخير.

معلومات تاريخية

في عام 1852، العالم البريطاني ستوكس، وصف لأول مرة مضان. وقدم مصطلح جديد نتيجة للتجارب مع الفلورسبار، والتي تنبعث منها الضوء الأحمر تحت الضوء فوق البنفسجي. وأشار ستوكس ظاهرة مثيرة للاهتمام. تبين أن الطول الموجي للإشعاع الفلورسنت هو دائما أكبر من تدفق ضوء الإثارة.

لتأكيد فرضية في القرن ال19 كانت هناك العديد من التجارب. وأظهر الباحثون أن مجموعة متنوعة من نماذج يتألق تحت تأثير الأشعة فوق البنفسجية. ومن بين المواد، من بين أمور أخرى، كانت البلورات، والراتنجات، والمعادن، والكلوروفيل والعقاقير الخام والمركبات غير العضوية والفيتامينات والزيوت. بدأ الاستخدام المباشر من الأصباغ للاختبارات البيولوجية فقط في عام 1930

مضان المجهر: وصف

عرضت بعض المواد المستخدمة في النصف الأول من القرن ال20 دراسات نوعية عالية. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. بفضل الأداء، وهو ما لا يمكن تحقيقه من خلال تباين الأساليب، أصبحت طريقة المجهر مضان أداة أساسية في البحوث الطبية الحيوية والبيولوجية. على قدم المساواة وتم الحصول على نتائج مهمة، وبالنسبة للمواد.

? ما هي المزايا التي لا طريقة الفحص المجهري مضان؟ باستخدام مواد جديدة أصبح ممكنا واختيار المكونات دون المجهرية خلية محددة للغاية. مضان المجهر يمكن الكشف عن جزيئات واحدة. مجموعة متنوعة من الأصباغ تسمح تحديد عناصر متعددة في وقت واحد. وعلى الرغم من قرار المكاني المحدود الحد حيود المعدات، والتي، بدورها، ويعتمد على خصائص محددة من العينة، وتحديد جزيئات دون هذا المستوى هو أيضا من الممكن تماما. عينات مختلفة بعد تألق ذاتي التشعيع معارض. يستخدم على نطاق واسع هذه الظاهرة في الصخور، وعلم النبات، وصناعة أشباه الموصلات.

ملامح

دراسة الأنسجة الحيوانية أو مسببات الأمراض في كثير من الأحيان معقدة أو ضعيفة جدا أو قوية جدا تألق ذاتي غير محددة. ومع ذلك، فإن قيمة في الدراسات تكتسب مقدمة في مكونات المواد متحمس عند طول موجي معين، وانبعاث اللازمة كثافة تدفق الضوء. Fluorochromes بمثابة الأصباغ قادرة على بشكل مستقل تعلق على الهياكل (مرئية أو غير مرئية). وبالتالي لديهم انتقائية عالية لهذا الهدف، والعائد الكم.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. وقد استخدم مضان المجهر على نطاق واسع منذ ظهور الصبغات الطبيعية والاصطناعية. أنها تمتلك بعض ملامح كثافة الانبعاثات والإثارة والتي تستهدف أهدافا محددة البيولوجية.

تحديد الجزيئات الفردية

في كثير من الأحيان، في ظروف مثالية، يمكنك تسجيل توهج عنصرا منفصلا. لهذا، من بين أمور أخرى، فمن الضروري توفير ضوضاء منخفضة بما فيه الكفاية للكشف والخلفية البصرية. جزيء فلوريسئين إلى الفشل بسبب photobleaching من يمكن أن تنبعث منها ما يصل إلى 300 ألف. الفوتونات. في كفاءة جمع 20٪ من هذه العملية، ويمكن تسجيلهم في مبلغ حوالي 60 ألف.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. مضان المجهر على أساس فوتوديوديس الانهيارات الثلجية أو الضرب الإلكترونية، سمح للباحثين لمراقبة سلوك الجزيئات الفردية من خلال ثاني، وفي بعض الحالات حتى دقائق.

تعقيد

ثمة مسألة رئيسية لصالح قمع الضوضاء الخلفية البصرية. يرجع ذلك إلى حقيقة أن العديد من المواد المستخدمة في تصميم الفلاتر والعدسات تظهر بعض تألق ذاتي، وجهود العلماء في المراحل الأولى كانت موجهة لإنتاج مكونات جود مضان منخفضة. ومع ذلك، أدت التجارب اللاحقة إلى استنتاجات جديدة. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. على وجه الخصوص، فقد وجد أن المجهر مضان، استنادا إلى الانعكاس الكلي الداخلي، لأنها تتيح لتحقيق خلفية انخفاض وارتفاع كثافة الضوء الإثارة.

تقنية

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. مبادئ المجهري مضان، استنادا إلى الانعكاس الكلي الداخلي هو استخدام موجة زائل أو زائل. ويحدث ذلك في الحدود بين وسائل الإعلام مع مختلف مؤشرات الانكسار. في هذه الحالة، فإن شعاع الضوء يمر عبر موشور. أنه يحتوي على معلمة عالية معامل الانكسار.

منظور المتاخمة للمحلول مائي أو الزجاج مع المعلمة منخفضة. إذا كان شعاع من الضوء الموجه إليها في زاوية ما هو أكثر أهمية، وينعكس شعاع تماما من واجهة. هذه الظاهرة، بدوره، يسبب موجات nonpropagating. وبعبارة أخرى، فإن المجال الكهرومغناطيسي ولدت الذي يخترق وسط مع انخفاض المعلمة معامل الانكسار لمسافة أقل من 200 نانومتر.

موجة زائل شدة الضوء سيكون كافيا لإثارة fluorophores. ومع ذلك، بسبب عمقها صغير للغاية، سوف يكون حجمه صغير جدا. والنتيجة هي الخلفية على مستوى منخفض.

تعديل

ويستند المجهر مضان على الانعكاس الكلي الداخلي، ويمكن تنفيذها مع برنامج التحصين الموسع الإضاءة. وهذا يتطلب العدسات مع الفتحة العددية عالية (1.4 على الأقل، ولكن من المستحسن أن وصلت إلى 1،45 حتي 1،6)، ومضاءة جزئيا جهاز المجال. ويتحقق هذا الأخير مع حجم البقعة الصغيرة. لمزيد من التجانس باستخدام حلقة رقيقة، والذي تم حظره من قبل جزء من تيار. لزاوية حرجة، وبعد ذلك هناك تفكير الكلي، نحن بحاجة إلى مستوى عال من الانكسار للوسط الغمر في العدسة وغطاء زجاجي المجهر.